小鼠抗IgE受體抗體elisa試劑盒用抗小鼠IgE單抗包被于酶標板上，標準品和樣品中的IgE與單抗結合，加入酶標抗體，形成免疫復合物連接在板上，加入酶底物TMB，出現藍色，加終止液硫酸，顏色變黃，在450nm處測OD值，IgE濃度與OD值成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中IgE濃度。
小鼠抗IgE受體抗體elisa試劑盒準備試劑與收集血樣：
1.收集標本：血清、血漿(肝素抗凝)、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存，避免反復凍融。正常標本測定前用標本稀釋液作1：10稀釋(取20ul，加標本稀釋液180ul,稀釋10倍)。
2.標準品液配制：使用前加入0.5ml蒸餾水混勻，配成2500ng/ml的溶液。設標準管8管，第一管加標本稀釋液900ul，第二至第八管加入標本稀釋液500ul。在第一管中加入2500ng/ml的標準品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul，移至第二管。如此反復作對倍稀釋，從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。
3.10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。
4.洗滌液：用重蒸水1:20稀釋(示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)
檢測程序
1.加樣：每孔各加入標準品或待測樣品100ul，將反應板充分混勻后置37℃120分鐘。
2.洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干。。
3.每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃60分鐘。
4.洗板：同前。
5.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗處反應15分鐘。
6.每孔加入100ul終止液混勻。
7.30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。
結果計算與判斷
1.所有OD值都應減除空白值后再行計算。
2.以標準品250、125、62.5、31.2、15.6、7.8、3.9、0ng/ml為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上作圖，畫出標準曲線。
3.根據樣品OD值在該曲線圖上查出相應IgE含量，再乘上稀釋倍數即可。
試劑盒性能
1.靈敏度：最小的IgE檢測濃度小于2ng/ml。
2.特異性：可同時檢測重組或天然的小鼠IgE。不與小鼠其它細胞因子有交叉反應。
3.重復性：板內、板見變異系數均小于12%。
掃一掃，關注微信
當前位置：